Ввод и редактирование текста

3. Методы идентификации грам(+) бактерий.

3.3. Новобиоционовый тест.

Принцип. S.saprophyticus нечувствителен к новобиоцину (5 мкг/диск), а другие коагулазо(-) стафилококки чувствительны.

1. Метод диффузии в агар

Ход исследования.

Þ Инокулируют 2-5 колоний стафилококка в 1 мл бульона на сердечно-мозговом переваре (можно использовать любой другой питательный бульон, обеспечивающий рост стафилококков).

Þ Инкубируют 2-5 ч при 35ºC.

Þ Доводят суспензию до мутности 0,5 по стандарту Мак-Фарланда добавлением стерильного физиологического раствора. (Можно сразу готовить суспензию по стандарту 0,5 Мак-Фарланда, опустив этап предварительного подращивания культуры.)

Þ Смачивают стерильный ватный тампон в суспензии и засевают поверхность агара Мюллера-Хинтона в чашке Петри.

Þ Помещают диск с новобиоцином (5 мкг) на засеянную поверхность агара, слегка придавливая его.

Þ Инкубируют чашки 16-18 ч при 35ºC в аэробных условиях и измеряют зону задержки роста вокруг диска.

Интерпретация результатов. Зона задержки роста 15 мм свидетельствует о резистентности к новобиоцину и предположительно указывает на S .saprophyticus (контрольный штамм АТСС 15305). У чувствительных культур (S. epidermidis АТСС 14990) зона задержки роста 16 мм в диаметре.

2. Метод посева на агар с новобиоцином

Среды и реагенты.

Þ Из стерильного водного раствора новобиоцина (10 мг в 10 мл дистиллированной воды) берут 0,5 мл и вносят в пробирку с 3 мл стерильного физиологического раствора.

Þ Содержимое пробирки переносят во флакон с 250 мл расплавленного и охлажденного до 50ºC 1,8% питательного агара, перемешивают и разливают среду в чашке Петри. Конечная концентрация новобиоцина в среде составляет 2 мкг/мл.

Ход исследования.

Þ Одну каплю суточной бульонной культуры исследуемого штамма засевают с помощью петли на поверхность агара (на одну чашку можно засеять не менее 25 штаммов).

Þ Посевы инкубируют 24 часа при 37ºC и регистрируют результаты.

Интерпретация результатов. Рост штамма в виде крупной бляшки свидетельствует об его устойчивости к новобиоцину. Полное отсутствие роста или наличие небольшого числа отдельных мелких колоний свидетельствует о чувствительности штамма к новобиоцину.

Ограничения и предосторожности.

1) S. saprophyticus наиболее распространенный среди урокультур коагулазо(-) стафилококк, устойчивый к новобиоцину.

2) Если тест проводится со стафилококками, выделенными не из мочи, среди коагулазо(-) стафилококков резистентными к новобиоцину могут быть S.sciuri, S.cohnii, S.xylosus.