Ввод и редактирование текста

3. Методы идентификации грам(+) бактерий.

3.11. Иммунологические тесты.

Серологическую идентификацию стрептококков осуществляют в реакциях латекс- и ко-агглютинации, используя набор антисывороток серогрупп A,B,C,D,F и G бета-гемолитических стрептококков, наиболее распространенных видов энтерококков и пневмококка. Обычно начальным этапом является экстракция специфического антигена химическим или ферментативным способом. Можно использовать различные коммерческие наборы, основанные на разных типах реакции агглютинации: Phadebact (Pharmacia Diagnostics), Streptex (Wellcome Diagnostics), SeroSTAT (Scott Laboratories). Для выявления капсульного антигена пневмококков применяют Phadebact Pneumococcus Test (Pharmacia Diagnostics), Wellcogen Test (Wellcome Diagnostics) Pneumoslide (BBL Mycrobiology Systems).

В качестве примера серодиагностики может служить наиболее простой способ проведения реакции с набором Streptex, позволяющим идентифицировать стрептококки групп A,B,C,D,F и G (по Лэнсфильд) в реакции латекс-агглютинации.

Принцип. Экстрагированные ферментативным способом группоспецифические антигены стрептококков выявляют путем агглютинации частиц латекса, покрытых специфическими антителами.

Реагенты. Набор Streptex (Wellcome Diagnostics) включает стрептококковые антисыворотки групп A,B,C,D,F и G; фермент для экстракции антигена; поливалентный положительный контроль и расходные материалы для постановки реакции.

Ход исследования.

Þ В пробирку для каждого тестируемого микроорганизма вносят по 0,4 мл экстрагирующего фермента и на его основе готовят слабую суспензию (5-10 колоний) бета-гемолитического стрептококка (следует быть внимательным при оценке результатов, если используются альфа- или негемолитические стрептококки).

Þ Суспензию инкубируют в водяной бане при 37°C от 10 мин до 1 часа (пробирки встряхивают после 5 мин инкубации).

Þ В каждый из 6 обозначенных кружков на специальной пластинке наносят 1 каплю латекса и 1 каплю экстрагированного антигена, смешивают их отдельными деревянными палочками, и покачивая в течение 1 мин учитывают результаты, сравнивая с положительным контролем (образуются хлопья, свидетельствующие об агглютинации частиц латекса); при отрицательном результате агглютинация отсутствует.

Ограничения.

1) как правило, только бета-гемолитические стрептококки дают надежные результаты с группоспецифическими антисыворотками по Лэнсфильд. Исключением являются негемолитические стрептококки B и D и энтерококки.

2) Стрептококки, агглютинирующиеся антисывороткой группы D, необходимо дополнительно идентифицировать по биохимическим свойствам, включая желче-эскулиновый тест и толерантность в 6,5% солевом бульоне.